Topmusicanswers
I stedet skal PCR -betingelserne optimeres; overvej følgende ved justering af PCR -betingelserne:
- Reducer mængden af skabelon.
- Forøg udglødningstemperaturen.
- Brug touchdown PCR.
- Reducer antallet af PCR -cyklusser.
- Omdesign primerne.
- Brug indlejrede primere.
- Forstærk produktet igen.
- Hvorfor virker min PCR ikke?
- Hvordan optimerer du PCR -forhold?
- Hvad forårsager udtværing i PCR?
- Hvordan ved du, om PCR er forurenet?
Hvorfor virker min PCR ikke?
At glemme kun en komponent i PCR -reaktionen, uanset om det er DNA -polymerase, primere eller endda skabelon -DNA, vil resultere i en mislykket reaktion. Den enkleste løsning er at gentage reaktionen. ... Hvis der stadig ikke er noget PCR -produkt efter dette, er chancerne stor, at der er noget andet, der forhindrer din reaktion.
Hvordan optimerer du PCR -forhold?
PCR -betingelser
- Brug højere denatureringstemperaturer (f.g., 98 ° C i modsætning til 94 ° C eller 95 ° C) for at tillade fuldstændig denaturering af skabelonen.
- Hold glødetider for GC-rige skabeloner så korte som muligt.
- Brug primere med et højere Tm (>68 ° C), fordi glødning kan forekomme ved en højere temperatur.
Hvad forårsager udtværing i PCR?
DNA -kontaminering, RNA i DNA -prøve, høj koncentration af DNA i PCR -reaktionen kan forårsage udtværing. ... DNA -udtværing forårsages normalt i planter på grund af høj koncentration af skabelon -DNA.
Hvordan ved du, om PCR er forurenet?
For at kontrollere opløsningen for kontaminering, samles negative kontrolreaktioner ved hjælp af nye reagenser, der vides ikke at være kontaminerede, og tilføj en af de mistænkte løsninger til hver reaktion. Denne reaktion viser forstærkede produkter, der tyder på forurening, er tegn på, at den tilsatte opløsning var forurenet.
