Topmusicanswers
- Hvorfor er der ingen forstærkning i PCR?
- Hvorfor forstærkede mit DNA ikke?
- Hvad sker der, hvis primere ikke tilføjes til PCR?
- Hvordan reparerer du uspecifik forstærkning i PCR?
Hvorfor er der ingen forstærkning i PCR?
Utilstrækkelig forstærkning kan resultere, hvis den oprindelige mængde skabelon er for lav. Forøg antallet af forstærkningscyklusser i trin på 5, eller, hvis det er muligt, øg mængden af skabelon. Forurenende stoffer i dNTP -blandingen kan føre til ufuldstændig eller forkert amplifikation eller PCR -inhibering. Brug dNTP'er i høj kvalitet.
Hvorfor forstærkede mit DNA ikke?
1) du har muligvis et dårligt primer -design eller reaktionsstandardisering (så evaluer dit primer -design og gør, som andre allerede har sagt, en gradient -PCR for at evaluere forskellige glødningstemperaturer); 2) Intet DNA (din ekstraktionsprotokol kan have mislykkedes), og derfor kan dine primere kun annealere for hinanden (eller amog dem).
Hvad sker der, hvis der ikke tilføjes primere til PCR?
Spørgsmål: Hvis du glemte at tilføje primerne til din PCR -reaktion, hvad ville der ske og hvorfor? 1. Din reaktion ville mislykkes, fordi Taq -polymerase ikke kan tilføje baser, uden at et lille stykke DNA allerede er til stede. ... Din reaktion ville mislykkes, fordi der ikke ville være noget enzym, der kunne tilføje nye nukleotidbaser.
Hvordan reparerer du uspecifik forstærkning i PCR?
Brug færre cyklusser, når skabelonkoncentrationen er høj, og brug flere cyklusser, når skabelonkoncentrationen er lav. 2. Forlængelsestiden var for lang: Overdreven forlængelsestid kan tillade uspecifik forstærkning. Brug generelt en forlængelsestid på 1 min/kb.
